產(chǎn)品名	Tth DNA ligase
別名
英文名	Tth DNA ligase
CAS號
分子式
分子量
EINECS編號
MDL號

產(chǎn)品說明

DNA 連接酶催化雙鏈DNA 中5’-磷基和 3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵的DNA 連接酶，以NAD+ 為輔酶，作為反應(yīng)的能量來源。
只有當(dāng)寡核苷酸與互補(bǔ)的靶DNA 完美配對，并且它們之間沒有間隙時(shí)，才會發(fā)生連接。對單鏈DNA 或RNA 和平末端DNA 不具有
活性。因此，可以檢測單堿基突變。高熱穩(wěn)定性允許用高密度雜交條件進(jìn)行連接，在高特異性和嚴(yán)格性下進(jìn)行SNPs 的精準(zhǔn)檢測。

本公司Tth DNA Ligase是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

活性定義

在20 μl 反應(yīng)體系中，45℃條件下，15 分鐘內(nèi)能使50% 的1 μg 經(jīng)BstEII 消化的λ DNA 片段（12 bp 粘性末端，相當(dāng)于0.0338pmole）
發(fā)生連接所需要的酶量定義為1 個(gè)活性單位。

活性測定條件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+, 10 mM DTT , 0.1% TritonX-10，45℃反應(yīng)。

濃度：40U/μl

保存條件：-20℃。

特點(diǎn)：耐熱性好；可在高溫條件下連接DNA鏈上的切刻位點(diǎn)。

應(yīng)用范圍：

連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ligase chain reaction, LCR）反應(yīng)中連接磷酸化寡核苷酸

連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測等位基因特異性

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Tth DNA Ligase	2000U	10000U
5×NAD型DNA Ligase Buffer	1 ml	1.5ml

質(zhì)量控制

經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

酶貯存緩沖液：20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50%(v/v) glycerol.

應(yīng)用實(shí)例：1. DNA連接反應(yīng)

1）按下表配制反應(yīng)體系

反應(yīng)組分	ul
5× Buffer	4
底物：互補(bǔ)粘性末端>8nt的DNA	100ng-1μg
Tth DNA ligase(40U/μl)	1
H2O	Variable
總體積	20

2) 45°C連接15min

3）對于較長的雙鏈DNA底物，瓊脂糖電泳檢測連接產(chǎn)物；對于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測連接產(chǎn)物。
 

注意事項(xiàng)

* Taq DNA Ligase 不能代替 T4 DNA Ligase，本公司有售T4 DNA連接酶（AE1301）

* 長時(shí)間儲存（>30 天），請存放在-80°C。